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猪精子样本DNA提取

2019-10-28 13:57:56
幸运飞艇生物
103
最后编辑:幸运飞艇生物 于 2019-10-29 16:14:30

实验步骤

1. 取200 μL唾液样本至2.0 mL离心管中,3500 rpm离心5 min,离心完后去除上清,再加入猪精液2mL,3500 rpm离心5 min,去上清;加入20 µL Proteinase K,混匀,再加入400 μL Buffer SL,涡旋振荡混匀,于65℃水浴30 min,期间颠倒混匀数次,简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。

注意:如后续实验对RNA敏感,此步骤后加入4 μL RNase A(10 mg/mL),室温放置10 min,去除RNA。

2. 吸取400 µL上清,加入等体积的Buffer GB,混匀,加入400 μL预冷的无水乙醇,颠倒数次混匀,简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。

注意: 幸运飞艇开奖 此时液体可能为透明或浑浊状态,均不影响后续实验。

3. 将上一步所得的上清转入吸附柱C1中(吸附柱C1已放于2.0 mL收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min,弃去收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

注意:幸运飞艇开奖 若样品体积超过吸附柱的容量,可分批加入;对于稀有少量样品,可将收集管中的液体重新上柱并离心一次,可提高回收效率。

4. 加入500 µL Buffer PD(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中 。

幸运飞艇开奖 5. 加入600 µL Buffer PW(使用前检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。

6. 重复漂洗操作步骤5。

7. 将吸附柱重新放回收集管中,于12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min,弃废液,将吸附柱C1置于室温放置5-10 min。

注意:Buffer PW漂洗后把吸附柱管盖打开放置数分钟以除去乙醇,否则多余的乙醇会影响后续的酶切反应、PCR扩增等实验。

8. 将吸附柱C1转入新的1.5 mL收集管中,向吸附膜中间位置悬空滴加30-50 µL的Buffer TE或者ddH2O,室温放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min,将溶液收集到收集管中。

实验结果